CellenONE è un sistema di selezione completamente automatizzato recentemente lanciato dalla società francese Enhancing Life per ottenere singole cellule nel campo del sequenziamento e clonazione a singola cellula. Rispetto ai citometri a flusso tradizionali comunemente presenti sul mercato, CellenONE è in grado di elaborare sospensioni cellulari con alti tassi di recupero da 1 µ l per qualsiasi dimensione di campione piccolo. FACS richiede tipicamente almeno 20000 cellule per la separazione a singola cellula, mentre CellenONE può separare le cellule da 50 cellule e le cellule selezionate hanno un'attività più elevata di quelle ordinate per FACS. L'intero sistema non richiede impostazioni lunghe, richiede solo 3-5 minuti, quindi è possibile avviare l'operazione di isolamento automatico senza la necessità di monitoraggio a lungo termine da parte del personale di laboratorio.

√ Basato su una tecnologia di distribuzione acustica piezoelettrica delicata e altamente accurata

√ Monitoraggio ottico automatico delle celle all'interno dell'ugello del distributore

Sulla base di ogni campione, la macchina mappa le fasi di allocazione

Le singole cellule assegnate hanno un'elevata attività

La posizione della cella determina se soddisfa la condizione di singola cella, che a sua volta determina se verrà ordinata nella goccia successiva

Abbiamo sviluppato un processo molto semplice. Utilizzando la nostra tecnologia PDC a base capillare di vetro, una piccola quantità di sospensione cellulare di dimensioni micrometriche può essere aspirata con quasi nessun volume morto. Quindi, utilizzando la tecnologia brevettata di erogazione/imaging, monitorare lo stato di erogazione di ogni goccia di farmaco. La nostra tecnologia di distribuzione PDC distribuisce tipicamente volumi di gocce di 100-300 picolitri. Poiché ogni goccia verrà espulsa, controlliamo se c'è una singola unità presente. Se c'è una cellula presente, la conserviamo nel vaso sanguigno bersaglio di vostra scelta. Potrebbe essere una micro unità, una micropiastra, una diapositiva o qualcos'altro che ti piace. Se non ci sono cellule nella goccia, o se ci sono più cellule, reciclamo la goccia per garantire che le vostre preziose cellule rare non vengano sprecate.

ordinamento delle celle

Raccolta singola cella

Amplificazione clone cellulare

Ricerca sulla specificità dei tessuti cellulari

Analisi omica NGS

La tecnologia HuBBBTM è un sistema di immortalazione delle cellule B molto potente, ma solo il 10% delle cellule B immortalate è stato clonato con successo, quindi i dati sono ancora molto limitati. La combinazione di HuBBBTM e CELLEN ONE migliora significativamente l'efficienza di clonazione al 90%, risparmiando molto tempo e garantendo il riconoscimento dei migliori cloni.

Scopo: Dimostrare la capacità delle cellule clonate per lo sviluppo di mAB (come CHO, ibridoma)

Difficoltà: garantire la capacità monoclonale e di sopravvivenza delle cellule isolate e coltivate separatamente

Metodo CellenONE: Le singole cellule sono stampate su diapositive al microscopio per verificare la loro specificità monoclonale. Il recupero/sopravvivenza della clonazione si ottiene assegnando il monoclonale a 96 pozzetti e contando n colonie/sopravvissuti dopo 7 giorni.

1. Scopo di confronto: confrontare il recupero clone di BD facsaria 3 e CellenONEX1

2. cellule sperimentali: trasformazione delle cellule CHO con il gene reporter negativo GFP e i geni legati alla fusione genica di resistenza. Durante l'esperimento, il 70% dei CHO era GFP negativo.

3. Dettagli sperimentali: La clonazione è stata eseguita in una piastra di 96 pozzetti, ciascuno dei quali integrato con 200 μ l di mezzo di coltura integrato con antibiotici selettivi adrenalinici. Dopo 5 giorni di coltivazione, almeno 5 cellule in una singola colonia hanno un numero di pori positivo. (GFP+cloni sono stati eliminati a causa della selettività)

4. Risultati attesi:

i. Il tasso di successo della classificazione FACS è del 100% (escluso GFP+ve)

Ii. Il tasso di successo della selezione CellenONE è del 70%.

5. Risultati effettivi:

Specifiche tecniche CellenONE:

1. Tecnologia di erogazione dei farmaci: erogazione delle gocce piezoelettriche

2. Volume di distribuzione: 50-800 pL per goccia

3. X/Y azionamento lineare, Z-asse azionamento

4. Risoluzione: 1 μm

5. Precisione (posizione assoluta)< 10 μm

6. Precisione (posizione ripetuta)< 3μm

7. Velocità più veloce: 100 centimetri al secondo

8. Area Spottable (millimetri): x = 180; Y=120 (2 piastre di microtitolo)

9. Dimensioni LxLxH (mm): 740 x 750 x 1580, peso 205 kg